ነጠላ-ኒውክሊየስ አር ኤን ኤ ቅደም ተከተል
የቴክኒክ እቅድ
የኒውክሊየሎችን ማግለል በ10× ጂኖሚክስ Chromium ™ ይገኛል፣ እሱም ባለ ስምንት ቻናል የማይክሮ ፍሎይዲክስ ስርዓት ድርብ መሻገሪያ ያለው። በዚህ ሥርዓት ውስጥ አንድ ጄል ዶቃዎች ባርኮድ እና ፕሪመር፣ ኢንዛይሞች እና ነጠላ አስኳል በናኖላይተር መጠን ባለው ዘይት ጠብታ ውስጥ ተሸፍነዋል፣ ይህም ጄል Bead-in-Emulsion (GEM) ይፈጥራል። GEM አንዴ ከተፈጠረ፣ በእያንዳንዱ ጂኤም ውስጥ የሕዋስ ሊሲስ እና የባርኮድ መለቀቅ ይከናወናሉ። mRNA በግልባጭ ወደ ሲዲኤንኤ ሞለኪውሎች 10× ባርኮዶች እና ዩኤምአይ የተገለበጡ ሲሆን እነዚህም ለመደበኛ ቅደም ተከተል ቤተ መፃህፍት ግንባታ ተገዢ ናቸው።
ባህሪያት
● ከቀዘቀዙ ቲሹዎች ነጠላ-ኒውክሊየስ እገዳን ማዘጋጀት
● Gel Bead-in-Emulsion (ጂኢኤም) ምስረታ ከዚያም ሲዲኤንኤ ውህደት
● በጂኤም ውስጥ ያለው እያንዳንዱ ዶቃ በ 4 ክፍሎች በተካተቱ ፕሪመርሮች ተጭኗል።
ፖሊ(ዲቲ) ጅራት ለኤምአርኤን ፕሪሚንግ እና ሲዲኤንአ ውህደት፣
የማጉላት አድሏዊነትን ለማስተካከል ልዩ ሞለኪውላር መለያ (UMI)
10x የአሞሌ ኮድ
ከፊል ንባብ 1 ተከታታይ ፕሪመር አስገዳጅ ቅደም ተከተል
ጥቅሞች
ነጠላ-ኒውክሊየስ አር ኤን ኤ ቅደም ተከተል የነጠላ ሴል አር ኤን ኤ ቅደም ተከተል ገደቦችን ያክላል፣ ይህም የሚከተሉትን ያስችላል፦
● የቀዘቀዙ ናሙናዎችን መጠቀም እና በአዲስ ናሙናዎች ብቻ የተገደበ አይደለም።
● የቀዘቀዙ ሴሎች ዝቅተኛ ጭንቀት ትኩስ ህዋሶች ከኤንዛይሚክ ሕክምና ጋር ሲነፃፀሩ ፣ በውጥረት በተቀሰቀሱ ጂኖች መልክ በተገለበጠ መረጃ ላይ ተንፀባርቋል።
● ቀይ የደም ሴሎችን አስቀድመው ማስወገድ አያስፈልግም
● ያልተገደበ የሴል ዲያሜትር
● ለመተንተን ብቁ የሆኑ ብዙ የናሙናዎች ስብስብ፣ በቲሹ መለያየት ወቅት ለሴሎች መሰባበር ወይም መጥፋት የተጋለጡትን ውስብስብ እና በቀላሉ የማይጎዱ ቲሹ ዓይነቶችን ጨምሮ።
በነጠላ ሕዋስ አር ኤን ኤ ቅደም ተከተል ሊተነተኑ የማይችሉ እና ለነጠላ ኒውክሊየስ አር ኤን ኤ ቅደም ተከተል ብቁ የሆኑ ናሙናዎች፡-
| ሕዋስ / ቲሹ | ምክንያት |
| የቀዘቀዙ ሕብረ ሕዋሳትን አያድሱ | ትኩስ ወይም ለረጅም ጊዜ የተቀመጡ ድርጅቶችን ማግኘት አልተቻለም |
| የጡንቻ ሕዋስ፣ ሜጋካርዮሳይት፣ ስብ… | ወደ መሳሪያው ለመግባት የሴል ዲያሜትር በጣም ትልቅ ነው |
| ጉበት… | ለመስበር በጣም የተበጣጠሰ፣ ነጠላ ሴሎችን መለየት አይችልም። |
| የነርቭ ሴል፣ አንጎል… | የበለጠ ስሜታዊ፣ ለጭንቀት ቀላል፣ የቅደም ተከተል ውጤቶችን ይለውጣል |
| የጣፊያ፣ ታይሮይድ… | በውስጣዊ ኢንዛይሞች የበለፀገ፣ የነጠላ ሴል እገዳን ማምረት ላይ ተጽእኖ ያሳድራል። |
ነጠላ-ኒውክሊየስ vs ነጠላ-ሴል
| ነጠላ-ኒውክሊየስ | ነጠላ-ሴል |
| ያልተገደበ የሕዋስ ዲያሜትር | የሕዋስ ዲያሜትር: 10-40 μm |
| ቁሱ የቀዘቀዙ ቲሹዎች ሊሆኑ ይችላሉ | ቁሱ ትኩስ ቲሹ መሆን አለበት |
| የቀዘቀዙ ሴሎች ዝቅተኛ ጭንቀት | የኢንዛይም ሕክምና የሕዋስ ውጥረት ምላሽ ሊያስከትል ይችላል |
| ቀይ የደም ሴሎችን ማስወገድ አያስፈልግም | ቀይ የደም ሴሎች መወገድ አለባቸው |
| ኑክሌር ባዮኢንፎርሜሽን ይገልፃል። | መላው ሕዋስ ባዮኢንፎርሜሽን ይገልጻል |
ዝርዝሮች
| ናሙና መስፈርቶች | ቤተ መፃህፍት | የቅደም ተከተል ስልት | ውሂብ ይመከራል | የጥራት ቁጥጥር |
| የእንስሳት ቲሹ ≥ 200 ሚ.ግ የእፅዋት ቲሹ ≥ 400 ሚ.ግ | 10x Genomics sn cDNA ላይብረሪ | ኢሉሚና PE150 | 100K PE በሴል ይነበባል (100-200 ጊባ) | በአጉሊ መነጽር ሲታይ 700-1200 ኒውክላይ / μl እና የኒውክሊየስ ትክክለኛነት |
ስለ ናሙና ዝግጅት መመሪያ እና የአገልግሎት የስራ ሂደት ለበለጠ ዝርዝር፣ እባክዎን ለማነጋገር ነፃነት ይሰማዎ ሀBMKGENE ባለሙያ
የአገልግሎት ሥራ ፍሰት
የሚከተለውን ትንታኔ ያካትታል።
● የጥራት ቁጥጥር፡ የሴሎች ብዛት፣ የጂን መለየት፣ የሴሎች ትክክለኛ መለያ፣ የአር ኤን ኤ ሞለኪውሎች እና የቃላት ብዛት
● የውስጥ ናሙና ትንተና፡-
የሕዋስ ስብስብ እና የክላስተር ማብራሪያ
ልዩነት አገላለጽ ትንተና፡ በክላስተር ውስጥ የ DEGs መለየት
የክላስተር DEGs ተግባራዊ ማብራሪያ እና ማበልጸግ
● የቡድን ትንተና፡-
የውሂብ ጥምር
ልዩነት መግለጫ ትንተና: በቡድን ውስጥ DEGs መለየት
የቡድን DEGs ተግባራዊ ማብራሪያ እና ማበልጸግ
● የላቀ ትንተና፡-
የሕዋስ ዑደት ትንተና
የውሸት ጊዜ ትንተና
የሕዋስ ግንኙነት ትንተና (የሞባይል ስልክ ዲቢ)
የጂን አዘጋጅ ማበልጸጊያ ትንተና (GSEA)
የውስጠ-ናሙና ትንተና
የሕዋስ ስብስብ;
ልዩነት አገላለጽ ትንተና፡ ክላስተር DEGs
የቡድን ትንተና
ልዩነት አገላለጽ ትንተና፡ የቡድን DEGs
የላቀ ትንተና፡-
የውሸት ጊዜ ትንተና;
የሕዋስ ዑደት ትንተና;
በBKGene ነጠላ-ኒውክሊየስ አር ኤን ኤ ቅደም ተከተል አገልግሎቶች በ10X Chromium የተቀናጁ እድገቶችን በእነዚህ ተለይተው በቀረቡ ህትመቶች ያስሱ፡
Wang, L. et al. (2021) 'ነጠላ-ሴል ትራንስሪፕቶሚክ ትንተና ስቴሮይድ የሚቋቋም አስም ተባብሶ ውስጥ ያለውን የሳንባ በሽታ የመከላከል መልክዓ ያሳያል'የዩናይትድ ስቴትስ አሜሪካ ብሔራዊ የሳይንስ አካዳሚ ሂደቶች, 118 (2), ገጽ. ኢ2005590118. doi: 10.1073 / pnas.2005590118
ዜንግ፣ ኤች እና ሌሎች (2022) 'ለተዘበራረቀ የጂን አገላለጽ እና ያልተለመደ የሜታቦሊክ ምልክት በመቃብር መቃብሮች' በሽታ ማይክሮ ኤንቫይሮመንት እና ሃሺሞቶ ታይሮዳይተስ ውስጥ ያለው ዓለም አቀፍ የቁጥጥር አውታረ መረብ'፣በ Immunology ውስጥ ድንበር, 13, ገጽ. 879824. doi: 10.3389 / FIMMU.2022.879824 / BIBTEX.
ቲያን, ኤች እና ሌሎች. (2023) 'ነጠላ-ሴል ትራንስክሪፕት ከተገደለው ኤድዋርድሲላ ታርዳ በፍሎንደር (Paralichthys olivaceus) ከተከተቡ በኋላ የሉኪዮተስ ልዩነት እና የበሽታ ተከላካይ ምላሾችን ያሳያል።አኳካልቸር, 566, ገጽ. 739238. doi: 10.1016 / J.AQUACULTURE.2023.739238.
ዩ፣ ዋይ እና ሌሎች (2023) 'የፎቶዳይናሚክስ ሕክምና የጨጓራ ካንሰር ላለባቸው ታካሚዎች የፀረ-እጢ በሽታ መከላከያን በማስተካከል የበሽታ መከላከያ መቆጣጠሪያ ነጥብ መከላከያዎችን ውጤት ያሻሽላል።የጨጓራ ካንሰር፣ 26(5)፣ ገጽ. 798–813። doi: 10.1007 / S10120-023-01409-ኤክስ / METRICS.
