ነጠላ-ኒውክሊየስ አር ኤን ኤ ቅደም ተከተል
የቴክኒክ እቅድ
የኒውክሊየስ መነጠል የሚገኘው በ10× ጂኖሚክስ ክሮሚየም™ ሲሆን ይህም ባለ ሁለት መስመር ክሮስተሮች ያሉት ስምንት-ቻናል ማይክሮፍሉይዲክስ ሲስተምን ያካትታል። በዚህ ስርዓት ውስጥ ባርኮዶች እና ፕሪመር፣ ኢንዛይሞች እና አንድ ነጠላ ኒውክሊየስ ያላቸው የጄል ዶቃዎች በናኖሊተር መጠን ባለው የዘይት ጠብታ ውስጥ ተሸፍነው ጄል ቤድ-ኢ-ኢሙልሽን (ጂኢኤም) ይፈጥራሉ። ጂኢኤም ከተፈጠሩ በኋላ የሴል lysis እና የባርኮዶች መለቀቅ በእያንዳንዱ ጂኢኤም ውስጥ ይከናወናል። mRNA በተገላቢጦሽ ወደ 10× ባርኮዶች እና UMI ባላቸው cDNA ሞለኪውሎች ይገለበጣሉ፣ እነዚህም ለመደበኛ ቅደም ተከተል ቤተ-መጽሐፍት ግንባታ ተገዢ ናቸው።
ባህሪያት
● ከቀዘቀዙ ሕብረ ሕዋሳት የአንድ-ኑክሊየስ እገዳ ዝግጅት
● የጄል ቤድ-ኢን-ኢሙልሽን (ጂኢኤም) ምስረታ እና የ cDNA ውህደትን ተከትሎ
● በጂኢኤም ውስጥ ያለው እያንዳንዱ ዶቃ በ4 ክፍሎች የተዋቀሩ ፕሪመሮች የተሞላ ነው፡
ለ mRNA ፕሪሚንግ እና ለ cDNA ውህደት የፖሊ(dT) ጅራት፣
የማጉላት አድልዎ ለማስተካከል ልዩ ሞለኪውላዊ መለያ (UMI)
10x ባርኮድ
የከፊል ንባብ 1 ቅደም ተከተል ፕሪመር የማሰር ቅደም ተከተል
ጥቅሞች
ነጠላ-ኒውክሊየስ አር ኤን ኤ ቅደም ተከተል የነጠላ-ሴል አር ኤን ኤ ቅደም ተከተል ገደቦችን ያልፋል፣ ይህም የሚከተሉትን ያስችላል፡
● የቀዘቀዙ ናሙናዎችን መጠቀም እና ትኩስ ናሙናዎችን ብቻ ሳይሆን
● የቀዘቀዙ ሴሎች ከአዲስ ሴሎች ኢንዛይማቲክ ሕክምና ጋር ሲነፃፀሩ ዝቅተኛ ውጥረት፣ በትራንስክሪፕቶሜም መረጃ ውስጥ በአነስተኛ ጭንቀት ምክንያት በሚመጡ ጂኖች መልክ ይንጸባረቃል
● ቀይ የደም ሴሎችን አስቀድሞ ማስወገድ አያስፈልግም
● ያልተገደበ የሕዋስ ዲያሜትር
● ለትንተና ብቁ የሆኑ ብዙ የናሙናዎች ስብስብ፣ በቲሹ መበታተን ወቅት ለሴል መሰባበር ወይም ለመጥፋት የተጋለጡ ውስብስብ እና በቀላሉ የሚሰበሩ የቲሹ ዓይነቶችን ጨምሮ
በነጠላ ሕዋስ አር ኤን ኤ ቅደም ተከተል ሊተነተኑ የማይችሉ እና ለነጠላ ኒውክሊየስ አር ኤን ኤ ቅደም ተከተል ብቁ የሆኑ ናሙናዎች፡
| ሕዋስ / ቲሹ | ምክንያት |
| አዲስ ያልቀዘቀዘ ቲሹ | ትኩስ ወይም ለረጅም ጊዜ የዳኑ ድርጅቶችን ማግኘት አልተቻለም |
| የጡንቻ ሕዋስ፣ ሜጋካርዮሳይት፣ ስብ… | የሕዋስ ዲያሜትር ወደ መሳሪያው ለመግባት በጣም ትልቅ ነው |
| ጉበት… | ለመስበር በጣም ደካማ፣ ነጠላ ሴሎችን መለየት የማይችል |
| የነርቭ ሴል፣ አንጎል… | የበለጠ ስሜታዊ፣ ለጭንቀት ቀላል፣ የቅደም ተከተል ውጤቶችን ይለውጣል |
| ፓንክሪስ፣ ታይሮይድ… | በውስጣዊ ኢንዛይሞች የበለፀገ፣ የአንድ ሴል እገዳን ማምረት ላይ ተጽዕኖ ያሳድራል |
ነጠላ-ኒውክሊየስ ከነጠላ-ሴል
| ነጠላ-ኒውክሊየስ | ነጠላ-ሴል |
| ያልተገደበ የሕዋስ ዲያሜትር | የሕዋስ ዲያሜትር፡ 10-40 μm |
| ቁሳቁስ የቀዘቀዘ ጨርቅ ሊሆን ይችላል | ቁሳቁስ ትኩስ ጨርቅ መሆን አለበት |
| የቀዘቀዙ ሴሎች ዝቅተኛ ጫና | የኢንዛይም ሕክምና የሕዋስ ውጥረት ምላሽ ሊያስከትል ይችላል |
| ቀይ የደም ሴሎች መወገድ የለባቸውም | ቀይ የደም ሴሎች መወገድ አለባቸው |
| የኒውክሊየር ባዮኢንፎርሜሽን መግለጫ | መላው ሕዋስ ባዮኢንፎርሜሽንን ይገልፃል |
ዝርዝር መግለጫዎች
| የናሙና መስፈርቶች | ቤተ መጻሕፍት | የቅደም ተከተል ስትራቴጂ | የሚመከር ውሂብ | የጥራት ቁጥጥር |
| የእንስሳት ሕብረ ሕዋስ ≥ 200 ሚ.ግ. የእፅዋት ቲሹ ≥ 400 ሚ.ግ. | 10x የጂኖሚክስ ኤስኤን ሲዲኤንኤ ቤተ-መጽሐፍት | ኢሉሚና PE150 | በአንድ ሕዋስ 100ሺህ የPE ንባቦች (100-200 Gb) | 700-1200 ኒውክሊየስ/μl እና የኒውክሊየስ ትክክለኛነት በአጉሊ መነጽር ታይቷል |
ስለ ናሙና ዝግጅት መመሪያ እና የአገልግሎት ፍሰት ተጨማሪ ዝርዝሮችን ለማግኘት፣ እባክዎን ከየቢኤምኬጄኔ ባለሙያ
የአገልግሎት የስራ ፍሰት
የሚከተለውን ትንታኔ ያካትታል፡
● የጥራት ቁጥጥር፡ የሴሎች ብዛት፣ የጂን መለየት፣ የሴሎች ትክክለኛ መለያ፣ የአር ኤን ኤ ሞለኪውሎች እና የአገላለጽ መጠን
● የውስጥ ናሙና ትንተና፡
የሕዋስ ክላስተር እና የክላስተር ማብራሪያ
የልዩነት አገላለጽ ትንተና፡- በክላስተሮች ውስጥ የDEGዎችን መለየት
የክላስተር DEGs ተግባራዊ ማብራሪያ እና ማበልጸጊያ
● በቡድን መካከል የሚደረግ ትንተና፡
የውሂብ ጥምረት
የልዩነት አገላለጽ ትንተና፡- የ DEGsን በቡድኖች መለየት
የቡድን DEGs ተግባራዊ ማብራሪያ እና ማበልጸግ
● የላቀ ትንተና፡
የሕዋስ ዑደት ትንተና
የውሸት ጊዜ ትንተና
የሕዋስ ግንኙነት ትንተና (ሴልፎንዲቢ)
የጂን ስብስብ ማበልጸጊያ ትንተና (GSEA)
የውስጥ ናሙና ትንተና
የሕዋስ ክምችት፡
የልዩነት አገላለጽ ትንተና፡ የክላስተር DEGs
በቡድን መካከል የሚደረግ ትንተና
የልዩነት አገላለጽ ትንተና፡ የቡድን ዲግሪዎች
የላቀ ትንተና፡
የውሸት ጊዜ ትንተና፡
የሕዋስ ዑደት ትንተና፡
በእነዚህ ተለይተው በቀረቡ ህትመቶች ውስጥ በ10X Chromium በBMKGene's single-nucleus RNA sequencing አገልግሎቶች የተመቻቹትን እድገቶች ያስሱ፡
ዋንግ፣ ኤል. እና ሌሎች (2021) 'የነጠላ ሕዋስ ትራንስክሪፕቶሚክ ትንተና የሳንባን በሽታ የመከላከል አቅምን በሚቀንስ የአስም መባባስ ውስጥ ያሳያል'፣የዩናይትድ ስቴትስ ብሔራዊ የሳይንስ አካዳሚ ሂደቶች, 118(2), ገጽ e2005590118. doi: 10.1073/pnas.2005590118
ዜንግ፣ ኤች. እና ሌሎች (2022) 'በግሬቭስ በሽታ ማይክሮ አካባቢ ውስጥ የበሽታ መከላከያ ሴሎች ውስጥ የተዛባ የጂን አገላለጽ እና ያልተለመደ የሜታቦሊክ ምልክት ዓለም አቀፍ የቁጥጥር አውታረ መረብ እና የሃሺሞቶ ታይሮይዳይተስ'፣በኢሚውኖሎጂ ውስጥ ድንበር, 13, ገጽ. 879824. doi: 10.3389 / FIMMU.2022.879824 / BIBTEX.
ቲያን፣ ኤች. እና ሌሎች (2023) 'ነጠላ-ሴል ትራንስክሪፕቶሜ በፍሎውደር ውስጥ ያልተነቃነቀ ኤድዋርድሲዬላ ታርዳ (ፓራሊችቲስ ኦሊቫሴየስ) ክትባት ከተደረገ በኋላ የሉኪዮተስን ልዩነት እና የበሽታ መከላከያ ምላሾችን ያሳያል'፣የአሳ እርባታ, 566, ገጽ 739238. doi: 10.1016/J.AQUACULTURE.2023.739238.
ዩ፣ ዋይ. እና ሌሎች (2023) 'የፎቶዳይናሚክ ቴራፒ የጨጓራ ካንሰር ባለባቸው ታካሚዎች ላይ የፀረ-ቲሞር መከላከያን በማደስ የበሽታ መከላከያ መቆጣጠሪያ መከላከያዎችን ውጤት ያሻሽላል'፣የጨጓራ ካንሰር, 26(5)፣ ገጽ 798–813። doi: 10.1007/S10120-023-01409-X/METRICS።
