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Secuenciación de amplicones 16S/18S/ITS - PacBio

Los genes de ARNr 16S y 18S, junto con la región del espaciador transcrito interno (ITS), sirven como marcadores moleculares clave para la identificación de especies debido a la combinación de regiones altamente conservadas e hipervariables, lo que los convierte en herramientas invaluables para la caracterización de organismos procariotas y eucariotas. La amplificación y secuenciación de estas regiones ofrece un método sin aislamiento para investigar la composición y diversidad microbiana en diversos ecosistemas. Si bien la secuenciación Illumina generalmente se centra en regiones hipervariables cortas como V3-V4 de 16S e ITS1, se ha demostrado que se puede lograr una anotación taxonómica superior mediante la secuenciación de la longitud completa de 16S, 18S e ITS. Este enfoque integral resulta en porcentajes más altos de secuencias clasificadas con precisión, alcanzando un nivel de resolución que se extiende a la identificación de especies. La plataforma de secuenciación en tiempo real de molécula única (SMRT) de PacBio destaca por proporcionar lecturas largas de alta precisión (HiFi) que cubren los amplicones completos, rivalizando con la precisión de la secuenciación de Illumina. Esta capacidad permite a los investigadores obtener una ventaja sin precedentes: una visión panorámica del panorama genético. La cobertura extendida aumenta significativamente la resolución en la anotación de especies, particularmente en comunidades bacterianas o fúngicas, lo que posibilita una comprensión más profunda de las complejidades de las poblaciones microbianas.


Detalles del servicio

Bioinformática

Resultados de la demostración

Publicaciones destacadas

Características del servicio

● Plataforma de secuenciación: PacBio Revio

● Modo de secuenciación: CCS (lecturas HiFi)

● Amplificación de la región objetivo seguida de la unión en tándem de los amplicones antes de la preparación de la biblioteca de campanas HiFi SMRT.

Ventajas del servicio

Mayor resolución taxonómica: Tsecuenciación de amplicones cortos de Han,lo que permite mayores tasas de clasificación de OTU a nivel de especie.

Llamada de base de alta precisión: Secuenciación en modo PacBio CCS (lecturas HiFi).

Sin aislamiento: Identificación rápida de la composición microbiana en muestras ambientales.

Ampliamente aplicable: Estudios de comunidades microbianas diversas.

Análisis bioinformático integral: El paquete QIIME2 más reciente (análisis cuantitativo de la ecología microbiana) con diversos análisis en términos de base de datos, anotación y OTU/ASV.

Amplia experienciaCon miles de proyectos de secuenciación de amplicones realizados anualmente, BMKGENE aporta más de una década de experiencia, un equipo de análisis altamente cualificado, contenido exhaustivo y un excelente servicio de atención al cliente posventa.

Especificaciones de servicio

Biblioteca

Estrategia de secuenciación

Datos recomendados

Amplicon

PacBio Revio

10/30/50 etiquetas K (CCS)

Requisitos de muestra

Concentración (ng/µL)

Cantidad total (µg)

Volumen (µL)

≥5

≥0,3

≥20

Entrega de muestras recomendada

Congele las muestras en nitrógeno líquido durante 3-4 horas y almacénelas en nitrógeno líquido o a -80 grados para su conservación a largo plazo. Es necesario enviar las muestras con hielo seco.

Flujo de trabajo del servicio

entrega de muestras

Entrega de muestras

Preparación de la biblioteca

Construcción de bibliotecas

Secuenciación

Secuenciación

Análisis de datos

Análisis de datos

Servicios postventa

Servicios posventa


  • Anterior:
  • Próximo:

  • 流程图第三版2-02

    Incluye el siguiente análisis:

    ● Control de calidad de los datos brutos

    ●Agrupación/Reducción de ruido de OTU (ASV)

    ●Anotación de OTU

    ●Análisis de diversidad alfa: múltiples índices, incluidos Shannon, Simpson y ACE.

    ●Análisis de diversidad beta

    ●Análisis intergrupal

    ●Análisis de correlación: entre factores ambientales y composición y diversidad de OUT

    ● Predicción del gen funcional 16S

     

    Histograma de distribución taxonómica

    foto 57

    Árbol filogenético de distribución de la comunidad

    foto 58

    Análisis de diversidad alfa: ACE

    índicefoto 59

     

    Análisis de diversidad beta: PCoA

    60 fotos

     

    Análisis intergrupal: ANOVA

    foto 61

     

     

     

    Descubra los avances facilitados por los servicios de secuenciación de amplicones de BMKGene con PacBio a través de una colección seleccionada de publicaciones.

    Gao, X. y Wang, H. (2023) 'Análisis comparativo de perfiles y funciones bacterianas del rumen durante la adaptación a diferentes fenologías (reverde vs. herbácea) en ovejas merinas alpinas con dos etapas de crecimiento en una pradera alpina', Fermentation, 9(1), p. 16. doi: 10.3390/FERMENTATION9010016/S1.

    Li, S. et al. (2023) 'Capturando la materia oscura microbiana en suelos desérticos usando metagenómica basada en culturomics y análisis de alta resolución', npj Biofilms and Microbiomes 2023 9:1, 9(1), pp. 1–14. doi: 10.1038/s41522-023-00439-8.

    Mu, L. et al. (2022) 'Efectos de las sales de ácidos grasos en las características de fermentación, la diversidad bacteriana y la estabilidad aeróbica del ensilaje mixto preparado con alfalfa, paja de arroz y salvado de trigo', Journal of the Science of Food and Agriculture, 102(4), pp. 1475–1487. doi: 10.1002/JSFA.11482.

    Yang, J. et al. (2023) 'La interacción entre biomarcadores de estrés oxidativo y microbiota intestinal en los efectos antioxidantes de extractos de Sonchus brachyotus DC. en el estrés oxidativo intestinal inducido por oxazolona en el pez cebra adulto', Antioxidants 2023, Vol. 12, Página 192, 12(1), p. 192. doi: 10.3390/ANTIOX12010192.

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