Ny fitokonana ny nuclei dia tanterahana amin'ny 10 × Genomics Chromium ™, izay rafitra microfluidika microfluidika valo miaraka amin'ny fiampitana indroa. Amin'ity rafitr'ity tontolo ity, ny voromailala misy barcode sy ny primes, ny anzima ary ny sela iray dia misy ny sokajin-tsofina iray ao anaty menaka manoliter-sizeds, ka niteraka an'i Gel Bead-in-emulsion (vatosoa). Vantany vao miforona ny vatosoa, ny lysis sela ary ny famotsorana ny barcode dia atao ao anaty vatosoa tsirairay. Mrna dia mifamadika amin'ny molekiola CDNO miaraka amin'ny 10 × Barcode sy Umi, izay iharan'ny fanamboarana tranomboky sequencing fenitra.
● Fanomanana ny fiatoam-bokatra tokana avy amin'ny tavy froven
● Ny fananganana gel bead-in-emulsion (vatosoa) narahin'ny cdna synthesis
● Ny vakana tsirairay ao anaty vatosoa iray dia enta-mavesatra amin'ny primers misy fizarana 4:
rambony poly (dt) ho an'ny mrna priming sy cdna synthesis,
Mpanondro molekular tsy manam-paharoa (UMI) mba hanitsiana ny fitambaran-jotra
10x barcode
Famatorana ny filaharan'ny ampahany amin'ny fizarana 1 sequencing primer
RNA Singleus Ndreus RNA dia namorona ny fetran'ny sela RNA Slow RNA, izay mamela:
● Ny fampiasana santionany mangatsiaka ary tsy voafetra ihany ny santionany vaovao
ا
● Tsy mila fanesorana ny sela mena taloha
● Diameter sela tsy manam-petra
● Santionany be dia be izay azo ekena amin'ny famakafakana, ao anatin'izany ny karazan-tsarimihetsika sy marefo marefo izay mora tohina amin'ny sela clumping na fandringanana mandritra ny fisarahana
Sela / tavy | antony |
Tavy frozen | Tsy afaka mahazo fikambanana vaovao na efa voavonjy |
Sela hozatra, Megakaryocyte, tavy ... | Ny sela sela dia lehibe loatra raha miditra amin'ny zavamaneno |
Aty ... | Voarakotra loatra ka tapaka, tsy afaka manavaka ireo sela tokana |
Neuron Cell, Brain ... | Mora tohina sy mora kokoa ny adin-tsaina, hanova ny valin'ny fandefasana |
Pancreas, tiroida ... | Manankarena amin'ny enzogous enzogous, miantraika amin'ny famokarana fampiatoana sela tokana |
Single-nucleus | afa-tsy sela |
Diameter sela tsy manam-petra | Diaroka sela: 10-40 μm |
Ny fitaovana dia mety ho tavy mangatsiaka | Ny fitaovana dia tsy maintsy ho tavy vaovao |
Fihenjanana ambany sela mangatsiaka | Ny fitsaboana anzima dia mety hiteraka fanehoan-kevitra sela |
Tsy misy sela mena tokony hesorina | Ny sela mena dia mila esorina |
Ny nokleary dia maneho ny bioinformation | Ny sela iray manontolo dia maneho bioinformation |
Fangatahana santionany | -BOKIN'NY Vavolombelon'i Jehovah | Paikady Sequencing | Data natolotra | Ny fifehezana kalitao |
Tavaha biby ≥ 200 mg Tissue fototra ≥ 400 mg | 10x Genomics Sn CDNA LIBRARY | Illumina Pe150 | Ny 100k pe dia mamaky isaky ny sela (100-200 GB) | 700-1200 Noklei / Noram-pinoana sy ny tsy fivadihan-tsakafo hita ao amin'ny microscope |
Raha mila fanazavana fanampiny momba ny fitarihana santionany sy ny serivisy serivisy, azafady azafady mba hiresaka amin'ny aExpert bmkgene
Dia ahitana ny famakafakana manaraka:
● Ny fanaraha-maso kalitao: Isan'ny sela, ny fitetezana gene, ny famantarana ny sela, ny molekiola RNA ary ny fomba fitenenana
● Famakafakana santionany ao anaty:
Sela clustering sy fanangonam-borona
Famakafakana fanehoana fanalehin-kevitra: Famantarana ny doka ao anaty klusters
Ny fanangonam-bola sy ny fanatsarana ny kluster degs
● Famakafakana vondrona:
Fitambaran'ny angon-drakitra
Famakafakana fanehoana fanazaran-tena: Famantarana ny doka amin'ny vondrona
Ny fanangonam-bidy sy ny fanatsarana ny Dogs vondrona
● Famakafakana lalindalina kokoa:
Famakafakana sela
Fandinihana pseudotime
Famakafakana ny serasera conle (cellphoneb)
Gene Set Analysis (GSEA)
Famakafakana inner-santion
CLUEL CLUSTERINGE:
Fandinihana ny fomba samy hafa: Cluster Degs
Famakafakana vondrona inter-vondrona
Fandinihana ny fomba fanehoana: Vondrona vondrona
Famakafakana lalindalina:
Fandinihana pseudotime:
Famakafakana sela:
Diniho ny fandrosoana fanamorana ny serivisy Singam-panadian'ny RNA bmkgene RNA
Wang, L. et al. (2021) Ny famakafakana sela-sela tokana dia manambara ny fijanonan'ny havokavoka ao amin'ny Asthma-fanoherana ny steroidNy fizotry ny Akademia nasionaly momba ny siansa any Etazonia, 118 (2), p. E2005590118. Doi: 10.1073 / pnas.2005590118
Zheng, H. et al. .Frontier ao amin'ny Immunology, 13, p. 879824. Doi: 10.3389 / fimmu.2022.879824 / Bibtex.
Tian, H. et al. (2023) Ny "Transcriptome sela-sela tokana dia tsy misy valiny momba ny heterogeneity sy ny famelabelarana ny valin-kafatra amin'ny leukocytes taorian'ny fanaovana vaksiny miaraka amin'ny edwardiella tsy mihetsika ao amin'ny Flounder (Paralichthyl) ',Aquaculture, 566, p. 739238. Doi: 10.1016 / J.A.AachArure.2023.739238.
Yu, Y. et al. .Homamiadana gastric, 26 (5), p. 798-813. Doi: 10.1007 / S10120-023-01409-x / metaly.