தயாரிப்புகள்

ஒற்றை- கருக்கள் RNA வரிசைமுறை

ஒற்றை செல் பிடிப்பு மற்றும் தனிப்பயன் நூலக கட்டுமான நுட்பங்களின் வளர்ச்சி, உயர்-செயல்திறன் வரிசைமுறையுடன் இணைந்து, செல் மட்டத்தில் மரபணு வெளிப்பாடு ஆய்வுகளில் புரட்சியை ஏற்படுத்தியுள்ளது. இந்த முன்னேற்றம் சிக்கலான செல் மக்கள்தொகையின் ஆழமான மற்றும் விரிவான பகுப்பாய்வை அனுமதிக்கிறது, அனைத்து செல்களிலும் சராசரியாக மரபணு வெளிப்பாட்டை உருவாக்குவதோடு தொடர்புடைய வரம்புகளை கடந்து, இந்த மக்கள்தொகைக்குள் உண்மையான பன்முகத்தன்மையைப் பாதுகாக்கிறது. ஒற்றை செல் RNA வரிசைமுறை (scRNA-seq) மறுக்க முடியாத நன்மைகளைக் கொண்டிருந்தாலும், ஒற்றை செல் இடைநீக்கத்தை உருவாக்குவது கடினமாக இருக்கும் மற்றும் புதிய மாதிரிகள் தேவைப்படும் சில திசுக்களில் இது சவால்களை எதிர்கொள்கிறது. BMKGene இல், அதிநவீன 10X ஜெனோமிக்ஸ் குரோமியம் தொழில்நுட்பத்தைப் பயன்படுத்தி ஒற்றை-நியூக்ளியஸ் RNA வரிசைமுறை (snRNA-seq) ஐ வழங்குவதன் மூலம் இந்த தடையை நாங்கள் நிவர்த்தி செய்கிறோம். இந்த அணுகுமுறை ஒற்றை செல் மட்டத்தில் டிரான்ஸ்கிரிப்டோம் பகுப்பாய்விற்கு ஏற்ற மாதிரிகளின் நிறமாலையை விரிவுபடுத்துகிறது.

இரட்டை குறுக்குவெட்டுகளுடன் எட்டு-சேனல் மைக்ரோஃப்ளூயிடிக்ஸ் அமைப்பைக் கொண்ட புதுமையான 10X ஜெனோமிக்ஸ் குரோமியம் சிப் மூலம் கருக்களின் தனிமைப்படுத்தல் நிறைவேற்றப்படுகிறது. இந்த அமைப்பிற்குள், பார்கோடுகள், ப்ரைமர்கள், என்சைம்கள் மற்றும் ஒரு ஒற்றை கருவை உள்ளடக்கிய ஜெல் மணிகள் நானோலிட்டர் அளவிலான எண்ணெய் துளிகளில் இணைக்கப்பட்டு, ஜெல் பீட்-இன்-எமல்ஷன் (GEM) ஐ உருவாக்குகின்றன. GEM உருவாக்கத்தைத் தொடர்ந்து, ஒவ்வொரு GEM-க்குள்ளும் செல் சிதைவு மற்றும் பார்கோடு வெளியீடு நிகழ்கிறது. பின்னர், mRNA மூலக்கூறுகள் cDNA-களில் தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷனுக்கு உட்படுகின்றன, 10X பார்கோடுகள் மற்றும் தனித்துவமான மூலக்கூறு அடையாளங்காட்டிகள் (UMI) ஆகியவற்றை இணைக்கின்றன. இந்த cDNA-கள் பின்னர் நிலையான வரிசைமுறை நூலக கட்டுமானத்திற்கு உட்படுத்தப்படுகின்றன, இது ஒற்றை-செல் மட்டத்தில் மரபணு வெளிப்பாடு சுயவிவரங்களின் வலுவான மற்றும் விரிவான ஆய்வை எளிதாக்குகிறது.

தளம்: 10× ஜீனோமிக்ஸ் குரோமியம் மற்றும் இல்லுமினா நோவாசெக் தளம்

எங்களை தொடர்பு கொள்ள

சேவை விவரங்கள்

உயிர் தகவலியல்

டெமோ முடிவுகள்

சிறப்பு வெளியீடுகள்

தொழில்நுட்ப திட்டம்

கருக்களின் தனிமைப்படுத்தல் 10× ஜெனோமிக்ஸ் குரோமியம்™ மூலம் அடையப்படுகிறது, இது இரட்டை குறுக்குவெட்டுகளுடன் எட்டு-சேனல் மைக்ரோஃப்ளூயிடிக்ஸ் அமைப்பைக் கொண்டுள்ளது. இந்த அமைப்பில், பார்கோடுகள் மற்றும் ப்ரைமர், என்சைம்கள் மற்றும் ஒரு ஒற்றை கருவுடன் கூடிய ஜெல் மணிகள் நானோலிட்டர் அளவிலான எண்ணெய் துளியில் இணைக்கப்பட்டு, ஜெல் பீட்-இன்-எமல்ஷன் (GEM) ஐ உருவாக்குகின்றன. GEM உருவாக்கப்பட்டவுடன், ஒவ்வொரு GEM இல் செல் சிதைவு மற்றும் பார்கோடுகளின் வெளியீடு செய்யப்படுகிறது. mRNA 10× பார்கோடுகள் மற்றும் UMI உடன் cDNA மூலக்கூறுகளாக தலைகீழாக படியெடுக்கப்படுகிறது, அவை மேலும் நிலையான வரிசைமுறை நூலக கட்டுமானத்திற்கு உட்பட்டவை.

அம்சங்கள்

● உறைந்த திசுக்களில் இருந்து ஒற்றை-கரு இடைநீக்கத்தைத் தயாரித்தல்.

● ஜெல் பீட்-இன்-எமல்ஷன் (GEM) உருவாக்கம், அதைத் தொடர்ந்து cDNA தொகுப்பு.

● ஒரு GEM இல் உள்ள ஒவ்வொரு மணியும் 4 பிரிவுகளைக் கொண்ட ப்ரைமர்களால் நிரப்பப்பட்டுள்ளது:

mRNA ப்ரைமிங் மற்றும் cDNA தொகுப்புக்கான பாலி(dT) வால்,

பெருக்க சார்பை சரிசெய்ய தனித்துவமான மூலக்கூறு அடையாளங்காட்டி (UMI)

10x பார்கோடு

பகுதியளவு படிக்க 1 வரிசைமுறை ப்ரைமரின் பிணைப்பு வரிசை

நன்மைகள்

ஒற்றை-கரு RNA வரிசைமுறை, ஒற்றை-செல் RNA வரிசைமுறையின் வரம்புகளைத் தாண்டி, பின்வருவனவற்றைச் செயல்படுத்துகிறது:

● புதிய மாதிரிகளுக்கு மட்டுமல்ல, உறைந்த மாதிரிகளின் பயன்பாடு.

● புதிய செல்களின் நொதி சிகிச்சையுடன் ஒப்பிடும்போது உறைந்த செல்களின் குறைந்த அழுத்தம், குறைந்த மன அழுத்தத்தால் தூண்டப்பட்ட மரபணுக்களின் வடிவத்தில் டிரான்ஸ்கிரிப்டோம் தரவுகளில் பிரதிபலிக்கிறது.

● இரத்த சிவப்பணுக்களை முன்கூட்டியே அகற்ற வேண்டிய அவசியமில்லை.

● வரம்பற்ற செல் விட்டம்

● பகுப்பாய்விற்குத் தகுதியான மாதிரிகளின் பெரிய வரிசை, திசு விலகலின் போது செல் கட்டியாகுதல் அல்லது அழிவுக்கு ஆளாகக்கூடிய சிக்கலான மற்றும் உடையக்கூடிய திசு வகைகள் உட்பட.

ஒற்றை செல் ஆர்.என்.ஏ வரிசைமுறையால் பகுப்பாய்வு செய்ய முடியாத மற்றும் ஒற்றை கரு ஆர்.என்.ஏ வரிசைமுறைக்கு தகுதியான மாதிரிகள்:

செல் / திசு	காரணம்
புதிதாக உறைந்த திசு	புதிய அல்லது நீண்டகாலமாக சேமிக்கப்பட்ட நிறுவனங்களைப் பெற முடியவில்லை.
தசை செல், மெகாகாரியோசைட், கொழுப்பு...	கருவிக்குள் நுழைய செல் விட்டம் மிகப் பெரியது.
கல்லீரல்…	உடைக்க மிகவும் உடையக்கூடியது, ஒற்றை செல்களை வேறுபடுத்திப் பார்க்க முடியவில்லை.
நியூரான் செல், மூளை...	அதிக உணர்திறன், அழுத்தத்திற்கு எளிதானது, வரிசைமுறை முடிவுகளை மாற்றும்.
கணையம், தைராய்டு...	ஒற்றை செல் இடைநீக்க உற்பத்தியைப் பாதிக்கும், எண்டோஜெனஸ் நொதிகள் நிறைந்தவை.

ஒற்றை-கரு vs ஒற்றை-செல்

ஒற்றை-கரு	ஒற்றை செல்
வரம்பற்ற செல் விட்டம்	செல் விட்டம்: 10-40 μm
இந்தப் பொருளை உறைந்த துணியாகப் பயன்படுத்தலாம்.	பொருள் புதிய துணியாக இருக்க வேண்டும்.
உறைந்த செல்களின் குறைந்த அழுத்தம்	நொதி சிகிச்சை செல் அழுத்த எதிர்வினையை ஏற்படுத்தக்கூடும்
சிவப்பு இரத்த அணுக்களை அகற்ற வேண்டிய அவசியமில்லை.	சிவப்பு இரத்த அணுக்களை அகற்ற வேண்டும்.
அணுக்கரு உயிரியல் தகவல்களை வெளிப்படுத்துகிறது	முழு செல் உயிரியல் தகவல்களை வெளிப்படுத்துகிறது.

விவரக்குறிப்புகள்

மாதிரி தேவைகள்

நூலகம்

வரிசைமுறை உத்தி

பரிந்துரைக்கப்பட்ட தரவு

தரக் கட்டுப்பாடு

விலங்கு திசு ≥ 200 மி.கி.

தாவர திசு ≥ 400 மி.கி.

10x ஜெனோமிக்ஸ் sn cDNA நூலகம்

இல்லுமினா PE150

ஒரு கலத்திற்கு 100K PE ரீடுகள்

(100-200 ஜிபி)

நுண்ணோக்கியில் 700-1200 கருக்கள்/μl மற்றும் கருக்களின் ஒருமைப்பாடு காணப்பட்டது.

மாதிரி தயாரிப்பு வழிகாட்டுதல் மற்றும் சேவை பணிப்பாய்வு பற்றிய கூடுதல் விவரங்களுக்கு, தயவுசெய்து ஒருவரிடம் பேச தயங்க வேண்டாம்.BMKGENE நிபுணர்

சேவை பணி ஓட்டம்

முந்தையது: தாவர/விலங்கு முழு மரபணு வரிசைமுறை

அடுத்தது: மரபணு அளவிலான சங்க பகுப்பாய்வு

பின்வரும் பகுப்பாய்வுகளை உள்ளடக்கியது:

● தரக் கட்டுப்பாடு: செல்களின் எண்ணிக்கை, மரபணு கண்டறிதல், செல்களின் துல்லியமான அடையாளம், ஆர்.என்.ஏ மூலக்கூறுகள் மற்றும் வெளிப்பாடு அளவு.

● உள் மாதிரி பகுப்பாய்வு:

செல் கிளஸ்டரிங் மற்றும் கிளஸ்டர் குறிப்பு

வேறுபட்ட வெளிப்பாடு பகுப்பாய்வு: கொத்துக்களில் DEG களை அடையாளம் காணுதல்

கிளஸ்டர் DEG களின் செயல்பாட்டு குறிப்பு மற்றும் செறிவூட்டல்

● குழுக்களுக்கிடையேயான பகுப்பாய்வு:

தரவு சேர்க்கை

வேறுபட்ட வெளிப்பாடு பகுப்பாய்வு: குழுக்களில் DEG களை அடையாளம் காணுதல்

குழு DEG களின் செயல்பாட்டு குறிப்பு மற்றும் செறிவூட்டல்

● மேம்பட்ட பகுப்பாய்வு:

செல் சுழற்சி பகுப்பாய்வு

போலி நேர பகுப்பாய்வு

செல் தொடர்பு பகுப்பாய்வு (CellPhoneDB)

மரபணு தொகுப்பு செறிவூட்டல் பகுப்பாய்வு (GSEA)

உள் மாதிரி பகுப்பாய்வு

செல் தொகுப்பாக்கம்:

வேறுபட்ட வெளிப்பாடு பகுப்பாய்வு: கொத்து DEGகள்

குழுக்களுக்கிடையேயான பகுப்பாய்வு

வேறுபட்ட வெளிப்பாடு பகுப்பாய்வு: குழு DEGகள்

மேம்பட்ட பகுப்பாய்வு:

போலி நேர பகுப்பாய்வு:

செல் சுழற்சி பகுப்பாய்வு:

10X Chromium ஆல் BMKGene இன் ஒற்றை-கரு RNA வரிசைமுறை சேவைகள் மூலம் எளிதாக்கப்பட்ட முன்னேற்றங்களை இந்த சிறப்பு வெளியீடுகளில் ஆராயுங்கள்:

வாங், எல். மற்றும் பலர் (2021) 'ஸ்டீராய்டு-எதிர்ப்பு ஆஸ்துமா அதிகரிப்பில் நுரையீரலின் நோயெதிர்ப்பு நிலப்பரப்பை ஒற்றை செல் டிரான்ஸ்கிரிப்டோமிக் பகுப்பாய்வு வெளிப்படுத்துகிறது',அமெரிக்காவின் தேசிய அறிவியல் அகாடமியின் நடவடிக்கைகள், 118(2), ப. e2005590118. doi: 10.1073/pnas.2005590118

ஜெங், எச். மற்றும் பலர் (2022) 'கிரேவ்ஸ் நோய் மற்றும் ஹாஷிமோட்டோவின் தைராய்டிடிஸின் நுண்ணிய சூழலில் நோயெதிர்ப்பு உயிரணுக்களில் ஒழுங்குபடுத்தப்படாத மரபணு வெளிப்பாடு மற்றும் அசாதாரண வளர்சிதை மாற்ற சமிக்ஞைக்கான உலகளாவிய ஒழுங்குமுறை வலையமைப்பு',நோயெதிர்ப்பு அறிவியலில் எல்லைகள், 13, பக். 879824. doi: 10.3389/FIMMU.2022.879824/BIBTEX.

தியான், எச். மற்றும் பலர் (2023) 'ஃப்ளவுண்டரில் (பாராலிச்திஸ் ஆலிவேசியஸ்) செயலிழக்கச் செய்யப்பட்ட எட்வர்ட்ஸெல்லா டார்டாவுடன் தடுப்பூசி போட்ட பிறகு, ஒற்றை செல் டிரான்ஸ்கிரிப்டோம் லுகோசைட்டுகளின் பன்முகத்தன்மை மற்றும் நோயெதிர்ப்பு மறுமொழிகளைக் கண்டறியிறது',மீன்வளர்ப்பு, 566, பக். 739238. doi: 10.1016/J.AQUACULTURE.2023.739238.

யூ, ஒய். மற்றும் பலர் (2023) 'இரைப்பை புற்றுநோயால் பாதிக்கப்பட்ட நோயாளிகளில் கட்டி எதிர்ப்பு நோய் எதிர்ப்பு சக்தியை மறுவடிவமைப்பதன் மூலம் ஒளிச்சேர்க்கை சிகிச்சை நோயெதிர்ப்பு சோதனைச் சாவடி தடுப்பான்களின் விளைவை மேம்படுத்துகிறது',இரைப்பை புற்றுநோய், 26(5), பக். 798–813. doi: 10.1007/S10120-023-01409-X/மெட்ரிக்ஸ்.