न्यूक्लीचे अलगाव 10 × जीनोमिक्स क्रोमियम by द्वारे प्राप्त केले जाते, ज्यात डबल क्रॉसिंगसह आठ-चॅनेल मायक्रोफ्लूइडिक्स सिस्टम असते. या प्रणालीमध्ये, बारकोड्स आणि प्राइमर, एंजाइम आणि एकल न्यूक्लियससह एक जेल मणी नॅनोलिटर-आकाराच्या तेलाच्या ड्रॉपमध्ये जेल मणी-इमल्शन (जीईएम) तयार करते. एकदा रत्न तयार झाल्यानंतर, प्रत्येक रत्नात सेल लिसिस आणि बारकोडचे रिलीज केले जाते. एमआरएनए 10 × बारकोड आणि यूएमआयसह सीडीएनए रेणूंमध्ये उलट लिप्यंतरित केले जाते, जे मानक अनुक्रमे लायब्ररीच्या बांधकामाच्या अधीन आहेत.
Fro गोठविलेल्या ऊतींमधून एकल-न्यूक्ली निलंबनाची तयारी
C सीडीएनए संश्लेषणानंतर जेल मणी-इमल्शन (जीईएम) ची निर्मिती
Rem रत्नातील प्रत्येक मणी 4 विभागांनी बनविलेल्या प्राइमरने लोड केली जाते:
एमआरएनए प्राइमिंग आणि सीडीएनए संश्लेषणासाठी पॉली (डीटी) शेपटी,
एम्प्लिफिकेशन बायस सुधारण्यासाठी अद्वितीय आण्विक अभिज्ञापक (यूएमआय)
10x बारकोड
आंशिक वाचन 1 अनुक्रम प्राइमरचे बंधनकारक अनुक्रम
सिंगल-न्युक्लियस आरएनए सिक्वेंसींग सिंगल-सेल आरएनए अनुक्रमांच्या मर्यादांना सक्षम करते, सक्षम करते:
Frog गोठवलेल्या नमुन्यांचा वापर आणि केवळ ताज्या नमुन्यांपुरतेच मर्यादित नाही
Tresh ताजे पेशींच्या एंजाइमॅटिक उपचारांच्या तुलनेत गोठविलेल्या पेशींचा कमी ताण, कमी तणाव-प्रेरित जीन्सच्या रूपात ट्रान्सक्रिप्टोम डेटामध्ये प्रतिबिंबित होतो
Red लाल रक्तपेशी काढण्याची गरज नाही
● अमर्यादित सेल व्यास
Tissue विश्लेषणासाठी पात्र असलेल्या नमुन्यांचा मोठा अॅरे, जटिल आणि नाजूक ऊतकांच्या प्रकारांसह जे ऊतकांच्या पृथक्करण दरम्यान सेल गंज किंवा नाश होण्याची शक्यता असते
सेल / ऊतक | कारण |
गोठविलेल्या ऊतकांना अनफ्रेश | ताजी किंवा दीर्घ-बचत संस्था मिळविण्यात अक्षम |
स्नायू सेल, मेगाकारोसाइट, चरबी… | इन्स्ट्रुमेंटमध्ये प्रवेश करण्यासाठी सेल व्यास खूप मोठा आहे |
यकृत… | खंडित करण्यासाठी खूपच नाजूक, एकल पेशी वेगळे करण्यात अक्षम |
न्यूरॉन सेल, मेंदू… | अधिक संवेदनशील, ताणतणावास सुलभ, अनुक्रम परिणाम बदलेल |
स्वादुपिंड, थायरॉईड… | एकल सेल निलंबनाच्या उत्पादनावर परिणाम करणारे अंतर्जात एंजाइम समृद्ध |
एकल-न्युक्लियस | एकल-सेल |
अमर्यादित सेल व्यास | सेल व्यास: 10-40 μm |
सामग्री गोठविलेल्या ऊती असू शकते | सामग्री ताजे ऊतक असणे आवश्यक आहे |
गोठलेल्या पेशींचा कमी ताण | सजीवांच्या शरीरात निर्मार्ण होणारे द्रव्य उपचारांमुळे सेल ताण प्रतिक्रिया होऊ शकते |
लाल रक्तपेशी काढण्याची आवश्यकता नाही | लाल रक्तपेशी काढण्याची आवश्यकता आहे |
विभक्त बायोइन्फॉर्मेशन व्यक्त करते | संपूर्ण सेल बायोइन्फॉर्मेशन व्यक्त करते |
नमुना आवश्यकता | लायब्ररी | अनुक्रम धोरण | डेटा शिफारस केलेला | गुणवत्ता नियंत्रण |
प्राणी ऊतक ≥ 200 मिलीग्राम वनस्पती ऊतक ≥ 400 मिलीग्राम | 10x जीनोमिक्स एसएन सीडीएनए लायब्ररी | इल्युमिना पीई 150 | 100 के पीई प्रति सेल वाचतो (100-200 जीबी) | मायक्रोस्कोप अंतर्गत 700-1200 न्यूक्ली/μL आणि न्यूक्लीइ अखंडता पाळली गेली |
नमुना तयारी मार्गदर्शन आणि सेवा वर्कफ्लोवरील अधिक माहितीसाठी, कृपया मोकळ्या मनानेबीएमकेजीन तज्ञ
खालील विश्लेषणाचा समावेश आहे:
● गुणवत्ता नियंत्रण: पेशींची संख्या, जनुक शोध, पेशींची अचूक ओळख, आरएनए रेणू आणि अभिव्यक्ती प्रमाणीकरण
● अंतर्गत नमुना विश्लेषण:
सेल क्लस्टरिंग आणि क्लस्टर भाष्य
विभेदक अभिव्यक्ती विश्लेषण: क्लस्टरमध्ये डीईजीची ओळख
कार्यात्मक भाष्य आणि क्लस्टर डीईजीची समृद्धी
● आंतर-गट विश्लेषण:
डेटाचे संयोजन
विभेदक अभिव्यक्ती विश्लेषण: गटांमध्ये डीईजीची ओळख
कार्यशील भाष्य आणि गट डीईजीची समृद्धी
● प्रगत विश्लेषण:
सेल चक्र विश्लेषण
स्यूडोटाइम विश्लेषण
सेल संप्रेषण विश्लेषण (सेलफोनेडबी)
जीन सेट संवर्धन विश्लेषण (जीएसईए)
अंतर्गत-नमुना विश्लेषण
सेल क्लस्टरिंग:
विभेदक अभिव्यक्ती विश्लेषण: क्लस्टर डीईजीएस
आंतर-गट विश्लेषण
विभेदक अभिव्यक्ती विश्लेषण: गट डीईजीएस
प्रगत विश्लेषण:
स्यूडोटाइम विश्लेषण:
सेल चक्र विश्लेषण:
या वैशिष्ट्यीकृत प्रकाशनांमध्ये बीएमकेजीनच्या सिंगल-न्यूक्लियस आरएनए अनुक्रम सेवांनी 10 एक्स क्रोमियमद्वारे सुलभ केलेल्या प्रगतीचे अन्वेषण करा:
वांग, एल. एट अल. .अमेरिकेच्या नॅशनल Academy कॅडमी ऑफ सायन्सेसची कार्यवाही, 118 (2), पी. E2005590118. doi: 10.1073/pnas.2005590118
झेंग, एच. एट अल. .इम्यूनोलॉजी मधील फ्रंटियर्स, 13, पी. 879824. डोई: 10.3389/fimmu.2022.879824/बिबटेक्स.
टियान, एच. एट अल. .जलचर, 566, पी. 739238. डोई: 10.1016/j.aquaculture.2023.739238.
यू, वाय. एट अल. .जठरासंबंधी कर्करोग, 26 (5), पीपी. 798-813. doi: 10.1007/s10120-023-01409-x/मेट्रिक्स.